快捷

(五)活性炭-Oelite柱色谱净化

在具抽真空侧口的农药色谱柱尾顶端塞上单孔5号橡皮塞，接上500mL圆底烧瓶，选择性多打开色谱柱活塞，残留连接抽真空装置。农药

在色谱柱中先后加入0.5g硅烷化Celite和5g活性炭Celite混合物，选择性多并使之填塞紧密。残留在吸附剂上面塞入1～2cm玻璃棉，农药用50mL25%甲苯-乙腈淋洗液预洗，选择性多当预洗液接近玻璃棉顶端0.5cm处时关闭柱活塞，残留断开真空装置，农药弃去圆底烧瓶中的选择性多溶液，重新将其接上色谱柱。残留将已制备好的农药10mL二氯甲烷提取液上柱，以5mL/min的选择性多速度淋洗。分别用10mL二氯甲烷和25mL淋洗液洗1L圆底烧瓶，残留并将洗出液分别上柱淋洗，当淋洗液接近玻璃棉顶端时加入下一溶液。

加人100mL淋洗液，并以5mL/min的速度淋洗。当淋洗液接近玻璃棉顶端时关闭柱塞。用真空旋转蒸发器将500mL圆底烧瓶中的淋出液浓缩至干，并立即取下圆底烧瓶。在500mL圆底烧瓶中立即加入5mL甲醇，以溶解提取净化后的残留农药。对于高含水量样品，需用每毫升溶液含有相当于20g样品的提取液上色谱柱净化；对于低含水量样品，需用每毫升相当于10g样品的提取液上柱净化

1、硅烷化助滤剂：Celite 545的制备用盐酸-水(1∶1)在2L烧杯中将150g助滤剂Celite 545(以下简称Celite)调成浆状，盖上玻璃盖，沸点下磁力搅拌子搅拌10min。冷却，过滤，用蒸话水洗至中性。先后用500mL甲醇和二氯甲烷洗Celite，并将其在通风橱中自然晾干。将Celite转移至1L具塞锥形瓶中，在120℃烘箱中加热干燥过夜(打开瓶塞)后，置于干燥器冷却。

将锥形瓶置于通风橱，准确吸取3mL二氯二甲基硅烷加入锥形瓶中，使之与Celite充分混合，室温下保存4h。在锥形瓶中加入500mL甲醇，摇匀，静置15min。过滤硅烷化Celite，用异丙醇洗至中性。在通风橱中将硅烷化Celite自然晾干，除去异丙醇。在105℃烘箱中将硅烷化Celite干燥2h，并在干燥器中冷却。将其保存于具塞容器中。

通过2个试验测定CeIite的硅烷化效果。一种方法是取大约1g Celite置于50mL水中，硅烷化Celite会漂浮；另一种方法是取1g Celite置于20mL用甲基红饱和的甲苯中，硅烷化Celite会呈黄色。在上述两种方法中，如果Celite颗粒在水中下沉并且(或)在甲基红饱和的甲苯中呈粉红色，则Celite中仍存在活性部位，需要重新进行硅烷化处理。

2、活性炭的纯化：用700mL盐酸将100g活性炭Nuchar S1N调成浆状，盖上玻璃盖，沸点下磁力搅拌子搅拌1h。

加700mL水，沸点下再搅拌30min。冷却，过滤，用水洗至中性。先用500mL甲醇然后用500mL二氯甲烷洗活性炭，在通风橱中自然晾干。在120℃烘箱中干燥4h后，置于干燥器中冷却，并将其保存于具塞容器中。

3、活性炭-Celite柱的活性测定：按上述方法制备活性炭-Celite(1∶4，m/m)净化柱；制备浓度为5μg／mL的不同氨基甲酸酯杀虫剂(西维因、灭虫威、灭虫威亚砜、灭多威)的甲醇溶液。灭虫威亚砜在溶液中易分解，混合标样应在使用前现配现用。分别吸取5mL上述溶液加入250mL圆底烧瓶和25mL容量瓶中，用甲醇将溶液定容至25mL，作为高效液相色谱(HPLc)分析的标样。

按上述方法用真空旋转蒸发器将圆底烧瓶中的标准样品溶液蒸发至干。当最后痕量的甲醇被蒸发完全后，将圆底烧瓶从蒸发器上取下，用10mL二氯甲烷将氨基甲酸酯残留物溶解。将圆底烧瓶中的二氯甲烷溶液过已制备好的吸附柱，并按上述方法淋洗。

将淋出液浓缩至干，用甲醇溶解，定容至25mL。按测定方法测定氨基甲酸酯的量，并计算其回收率。如果回收率≥95％，则活性炭是达到要求的。

(六)测定

采用高效液相色谱仪测定，柱后衍生化，荧光检测。

1、 原理

甲醇溶液中的农药残留以乙腈-水为流动相，通过C₈反相高效液相色谱柱，进行梯度洗脱分离。柱后淋出液中的农药残留在碱性条件下被在线水解为甲胺化合物，该化合物与邻苯二醛和2-巯基乙醇在线反应，生成荧光基团，通过荧光检测器检测。这一柱后衍生化荧光检测的测定方法对于含有氨基甲酸酯结构的农药残留具有很好的选择性。

2、仪器

(1)溶剂过滤装置：具Luer-Lip头的10mL注射器，配有直径为13mm的Swinny不锈钢过滤头和直径为13mm的5．0μm LS型过滤器，也可配备直径为13mm用聚丙烯固定的0．22μm尼龙滤膜。也可选择使用预装好的无需注射器的装置。高效液相色谱仪包括下列组件(图7-2)：流动相传输系统、程序控制的高效液相色谱梯度洗脱系统、进样器(具有10μL进样环的自动取样器)、不锈钢保护柱(内含25～37μm的C₈或C₁₈滤芯)、柱温箱或柱加热器、分析柱 [25cm×4.6mm(内径)，填充6μm Zorbax C₈球形颗粒，柱填充物包括5μm或6μm由辛硅烷试剂键合形成的单分子球形结合物]。连接管[编号为304的不锈钢管(外径为1.6mm，内径为O.18mm)]连接进样器、色谱柱与第一个T形管。

(2)柱后衍生单元：该单元由下列组件构成：Tericon涂层的玻璃柱[60cm×25mm(内径)作为储液器，柱内存有氢氧化钠和OPA-MER(二反应溶液；通氮气增加柱压，并通过调节压力大小控制合适的溶液流速，可以用泵代替氮气增压]、Tefton限制管[6m×0.5mm(内径)，其将每个储液器与15cm)4 0.18mm(内径)的不锈钢管相连接，该不锈钢管依次与内径为0.74mm的不锈钢T形混合器(如ZVT-062)相连，与流动相相通]、氨基甲酸酯水解室[不锈钢管、3m×0.48mm(内径)，编号为321，绕有与小型烘箱相连的加热管以维持水解室的温度始终保持在100⁰C、反应管[25cm不锈钢管，一端与T形混合器相连以输送OPA-MERC溶液，另一端连接检测器内腔，1.5cm×0.3mm(内径)]。

目前可以从一些厂家购买商品化的柱后衍生反应装置，以代替上述组件。该反应装置最好配备双泵。

(3)荧光检测器：荧光检测器为双单色器，配有≤20pL的腔体。

(4)记录仪：记录仪为带状制图仪或者与检测器连用的自动积分仪。

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